Обнаружение Диазепама, Нитразепама, Оксазепема, Апоморфина, Дионина, ПромедолаСтраница 2
Выделение из биологического материала: Биоматериал трижды настаивают с новыми порциями насыщенного водного раствора щавелевой кислоты (рН=1). Через час после каждого настаивания вытяжки отделяют от биологического материала центрифугированием. Объединённый кислый центрифугат трижды взбалтывают со смесью (1:1) хлороформа и этилсалицелата. Затем кислый центрифугат подщелачивают до рН=10 и трижды взбалтывают с новыми порциями смеси хлороформа и этилсалицелата (1:1). Полученные при этом вытяжки подвергают исследованиюна наличие нитразепама.
Предварительные пробы на наличие нитразепама в моче: Нитразепам можно обнаружить в моче в неизменном виде и в виде 7-амино- и 7-ацетиламино-производных, являющихся метаболитами этого препарата, как указанно ниже.
Обнаружение нитразепама в неизмененном виде в моче. 5 мл мочи подщелачивают аммиаком до рН = 10 и прибавляют 250 г дитионита натрия (Na2S2O4). Смесь взбалтывают в течение 10 мин, затем нагревают при 50 °С в течение часа и охлаждают. Охлажденную жидкость 10 мин взбалтывают с 10 мл смеси, состоящей из равных объемов метиленхлорида и этилацетата. После этого от водной фазы отделяют слой смеси органических растворителей. Слой взбалтывают с 10 мл 5 %-го раствора буры. Водную фазу отделяют от фазы органических растворителей. К фазе органических растворителей прибавляют 5 мл 0,2 н. раствора соляной кислоты и взбалтывают. После этого отделяют фазу органических растворителей. 4 мл кислой водной фазы охлаждают в ледяной воде и прибавляют 0,2 мл 0,4 н. раствора нитрита натрия. Через 5 мин к кислому раствору прибавляют 0,2 мл 2%-го раствора сульфамината аммония. Жидкость хорошо перемешивают и оставляют на 5 мин, а затем прибавляют 0,2 мл 0,4 %-го раствора N-1-нафтилэтилендиамина дигидрохлорида. При наличии нитразепама в моче появляется вишнево-красная окраска (λ = 555 нм).
Выделение метаболитов нитразепама из мочи. Выделение этих соединений из мочи проводят так же, как и при обнаружении нитразепама, находящегося в моче в неизмененном виде. Однако при исследовании метаболитов в процессе их выделения из мочи к ней не прибавляют дитионит натрия. Выделенные из мочи0 метаболиты нитразепама обнаруживают методом хроматографии.
Обнаружение нитразепама и его метаболитов методом хроматографии. Исследуемый раствор наносят на хроматографическую пластинку, покрытую тонким закрепленным слоем силикагеля, или на пластинку «силуфол». Для развития хроматограммы на пластинке применяют систему растворителей, являющуюся смесью этилацетата, метилового спирта и 25 %-го аммиака (85: 10:5). Пятна нитразепама и его метаболитов на пластинках проявляются реактивом Драгендорфа.
Приготовление хроматографических пластинок (см. Приложение 2, способ 10).
Обнаружение нитразепама по УФ- и ИК-спектрам. Раствор нитразепама в этиловом спирте имеет максимумы поглощения при 218 и 260 нм, в 0,1 и. растворе серной кислоты имеет максимум поглощения при 277 нм и изгиб около 340 нм; нитразепам в ИК-области спектра (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1692, 1615, 1352 и 702 см.
ОКСАЗЕПАМ
Оксазепам (тазепам, адумбран, нозепам, пракситен, серакс, серенал и др.) является производным 1,4-бензодиазепина. Он представляет собой кристаллический порошок, почти не растворимый в воде, растворимый в этиловом спирте и хлороформе. Этот препарат экстрагируется органическими растворителями, из щелочных водных растворов.
Применение. Действие на организм. По фармакологическим свойствам оксазепам близкий к хлордиазепоксиду и диазепаму. Он менее токсичен, чем диазепам, обладает слабым противосудорожным действием и менее выраженным, чем диазепам, миорелаксантным эффектом. Применяется в медицине при неврозах, депрессивных состояниях, при бессоннице на почве нервного растройства.
Метаболизм. Оксазепам является одним из метаболитов диазепама. После приема оксазепама максимальный уровень его в плазме достигается через 4 ч, а через 48 ч он исчезает из плазмы. Оксазепам находится в плазме в виде глюкуронида. В виде глюкуронида он выделяется с мочой, а с калом он выделяется в неизмененном виде.