Диагностика и специфическая терапия инвазии ротовых простейших у больных пародонтитом

Страница 3

3. КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

П ринцип метода: содержимое пародонтальных карманов засевают в питательную среду и после инкубации микроскопируют раздавленную каплю.

Реактивы и оборудование:

- стерильная корневая игла с турундой;

- предметное и покровное стекла;

- пробирки;

- капилляр или пипетка;

- питательная среда;

- термостат;

- микроскоп.

Забор содержимого пародонтальных карманов производят аналогично предыдущим методам, однако наиболее приемлемым является забор стерильным стоматологическим экскаватором № 2 из глубины кармана. Содержимое смывают в жидкую питательную среду, которую затем инкубируют в термостате при Т - 37° С. Культура развивается в течение 3-6 суток. По окончании срока инкубации со дна пробирки капилляром или пипеткой берут осадок, каплю помещают на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют с об. 40, ок. 7.

Применяется много питательных сред, но основными ингридиентами их являются физиологический раствор, сыворотка и углеводы.

Рекомендуют использовать простую сывороточную среду. Она проста в приготовлении и дает хороший рост трихомонад. Для ее приготовления берут 9 частей стерильного физиологи­ческого раствора, добавляют 1 часть лошадиной или бычьей сыворотки и 1 петлю стерильного рисового крахмала. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-10 мл.

Наш опыт по культуралъной диагностике ротовых простей­ших показал, что простая сывороточная среда не всегда дает положительные результаты. Очевидно, это связано с региональ­ными физико-химическими характеристиками воды, из которой готовят физиологический раствор. Физиологический раствор, приготовленный аптекой, у нас всегда имел рН 5,1 и питатель­ная среда на таком растворе без добавления буферных солей роста трихомонад не давала.

Поэтому мы рекомендуем применять среду Павловой. Способ приготовления: хлористый натрий - 4,25 г, двузамещенный фос­форнокислый натрий /Na2HPO4 X 2 H2O2 , можно и Na2HPO4 X 12 H2O2 - 0,3 г, однозамещенный фосфорнокислый калий / K2HPO4 - 0,23 г, дистиллированная вода - 500,0 мл. Раст­вор стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм в течение 20 минут. Перед засеванием материала раствор разливают в пробирки по 9,5 мл, добавляют О,5 мл лошадиной сыворотки и петлю стериль­ного рисового крахмала.

В качестве сыворотки применяют нормальную лошадиную сыворотку для приготовления питательных сред или сыворотку лошадиную сухую. Предварительно флакон с нормальной лошадиной сывороткой раскупоривают и оставляет в термостате на 3-е су­ток для испарения консерванта, а сухую растворяют в дистил­лированной воде.

Культуральным методом на среде Павловой десневые амебы выявлены в незначительном числе /3,74% из всех положитель­ных результатов, полученных другими протозоологическими ме­тодами/, поэтому для выделения их лучше использовать среду следующего еоетава: физиологический раствор - 1000,0 мл, мясо-пептонный бульон - 20,0 мл, печеночный экстракт -20,0 мл, глюкоза - 2,5 г, Na2HPO4- 0,45 г, K2HPO4 - 0,45 г, рН = 7,4- 7,8, К простерилизованной среде добавляют 10,0 -15,0 мл инактивированной лошадиной сыворотки, разливают в пробирки; по 6— 10,0 мл ив каждую вносят 1-2 петли стерильного рисового крахмала.

Амебы развиваются в щелочной среде, а трихомонады предпочитают кислую.

Рост трихомонад на жидкой питательной среде Павловой выявлен в 76,92% среди всех положительных случаев. Определение в культуре этих простейших не представляет особого тру­да, посколько в поле зрения скапливается от 5 до 30-50 осо­бей. Незначительная часть ротовых трихомонад имеет тот же вид, что и в нативном препарате. Подавляющее же число особей округляется, приобретает шарообразную форму. В цитоплазме видны заглоченные зерна крахмала. Выбрасывание жгутиков ак­тивное, у некоторых крупных трихомонад можно увидеть движе ние ундулирующей мембраны в виде волны, пробегающей по длиннику тела.

4. ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ ПРОТОЗООСКОПИЯ

Учитывая, что в некоторых случаях протозооскопия окра­шенных препаратов не позволяет четко отдифференциовать мел­кие особи десневых амеб без фагоцитированых лейкоцитов, ваку­олей, псевдоподий от ротовых трихомонад, предложено использо­вать люминесцентную протозооскопию.